EXACTITUD Y PRECISIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO

DETERMINACIÓN DE LA EXACTITUD DE UN MÉTODO ANALÍTICO:


La exactitud se refiere a la desviación de un resultado analítico respecto al valor verdadero, por tanto, se relaciona con la existencia de un error sistemático que haga que los resultados se desvíen de forma constante respecto a los valores esperados; es decir, que la media experimental difiera del valor verdadero.


Existe material de referencia para la determinación de nandrolona en la muestra, que se usan en los protocolos propuestos por la agencia mundial antidoping (WADA), para la verificación de la calidad de la metodología analítica utilizada. Nosotros encontramos el material siguiente, que es nombrado en varios artículos referidos a análisis de nandrolona en orina:


19-Norandrosterone (2.13 ng/g) en orina humana liofilizada (freeze-dried) (20 mL)

nº de referencia MX002

Además de este ejemplo, existe material de referencia para todos los demás esteroides anabolizantes prohibidos en competición cuya producción es financiada por el WADA (World Anti-Doping Agency) y el COI (Comité Olímpico Internacional). Podemos consultar algunos de ellos en la siguiente lista:

Además, como curiosidad, cabe mencionar que sólo la WADA tiene la capacidad de acreditar el material de referencia certificado referido a estas sustancias y que controla el acceso a los mismos a través de acreditaciones: sólo los laboratorios reconocidos por este organismo tienen acceso a dicho material.

El análisis de este material de referencia certificado, nos permitirá determinar si nuestro método analítico es exacto o no comparando el valor verdadero (la concentración certificada) con la media experimental que hayamos obtenido aplicando el test estadístico t de student.

En cuanto a los métodos oficiales, el WADA publica criterios de validación de los métodos analíticos, que usan los laboratorios para valorar la calidad de su metodología. Se suele usar el documento técnico TD2003IDCR, que podemos consultar en el siguiente link: http://www.wada-ama.org/rtecontent/document/criteria_1_2.pdf

DETERMINACIÓN DE LA PRECISIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO:


Una vez vistos los métodos de análisis que podemos emplear en la determinación de anabolizantes en orina, realizaremos un estudio para comprobar la precisión de éstos (y si hay varios métodos determinar cuál de ellos es más preciso).

La precisión es el nivel de concordancia entre los resultados obtenidos cuando aplicamos varias veces el mismo método analítico a la misma muestra. Cuánto menor es el grado de concordancia, menor es la precisión, y esto es indicativo de que el método presenta errores aleatorios, que hacen que el resultado se desvíe del valor medio. Por el contrario, cuanto mayor sea el grado de concordancia entre los resultados, mayor precisión presentará el método analítico, lo que indica que el método no presenta errores aleatorios, o que estos errores son aceptables.

Para determinar la precisión debemos conocer la varianza de los resultados. Con ella podremos calcular el coeficiente de variación. Por norma general, si éste es menor del 5% el método se puede considerar preciso.

El coeficiente de variación se calcula mediante la siguiente expresión matemática:La varianza también permite comparar dos métodos analíticos, siendo más preciso el que presente menor varianza.

Además, para comprobar si existe una diferencia real entre las varianzas de los dos métodos, es decir, para determinar si son igual de precisos o no, podemos aplicar el test F de dos colas utilizando los resultados obtenidos para la desviación típica o estándar. Esto nos permite, por ejemplo, determinar si un método es preciso o no testándolo con otro del que sabemos que sí lo es.

La medida de la desviación estándar puede ser subdividida en 3 categorías:

- Repetibilidad: Da una idea del tipo de variabilidad que se puede esperar cuando el método es desarrollado por un mismo analista, en un mismo laboratorio con un mismo instrumento analítico y en un periodo corto de tiempo. Por ejemplo, la variabilidad esperada entre los resultados cuando la muestra es analizada por duplicado.

- Reproducibilidad: Se obtienen resultados independientes mediante el mismo método aplicado a la muestra en diferentes condiciones (diferentes laboratorios, diferentes instrumentos analíticos, diferente analista, periodos largos de tiempo…).

- Precisión intermedia: ha sido definida por la ICH como la variabilidad obtenida en un análisis realizado en un mismo laboratorio en un periodo de tiempo prolongado.
La repetibilidad y la reproducibilidad dependen de la concentración de analito y, en consecuencia, debieran determinarse para varias concentraciones. Lo más común es hacer 11 réplicas del analito en una disolución patrón, aunque este número de réplicas se puede variar en función de diversos factores.

Por ejemplo, en el texto: "The Fitness for Purpose of Analytical Methods. A laboratory guide to method validation and related topics. Eurachem Guide, 1998 y Guía para la validación de métodos de ensayo. OAA.DC-LE-05", encontramos esta tabla que muestra el número de réplicas que consideran que se deberían elaborar relacionadas con repetibilidad y reproducibilidad.

El criterio de aceptación utilizado depende del tipo de análisis que se esté realizando. Por ejemplo, en análisis farmacológicos, se suele considerar preciso un método si su CV es menor del 1%; sin embargo, lo más común en muestras biológicas como es el caso de la orina, se suele aceptar una CV menor al 15% a concentración límite o al 10% a otras concentraciones.
Aunque como ya hemos dicho, por norma general se acepta que un método es preciso cuando su CV es menor al 5%.

Como ejemplo del cálculo de la precisión de un método analítico, vamos a considerar el caso real de la determinación de 19-norandrosterona en orina humana por Cromatografía de Gases acoplada a Espectrometría de Masas de Trampa de Iones realizada por Juan Francisco Sánchez Bruzón, Rodny Montes de Oca Porto, Mirta Torres Castellanos, Roberto
Oropesa Rodríguez y Mario José Granda Fraga para el Instituto de Medicina del Deporte, Laboratorio Antidoping, de la Ciudad de La Habana. El artículo completo puede leerse en este link http://www.cnic.edu.cu/revista%20CENIC/revista/files/CQ-2004-2-059-068.pdf :

Precisión intra-ensayo (repetibilidad)
En este caso, la precisión se estudió a dos niveles de concentración (una más baja de 0,5 ng/mL y una de mayor concentración de 10 ng/mL). Se procesaron cuatro réplicas de cada nivel de concentración en un mismo día y se calculó el coeficiente de variación de los tiempos de retención relativos (TRR) y el CV de la relación entre los iones.
Como criterio de aceptación, se tuvo en cuenta que el CV para el nivel inferior fuese menor al 20 % y en el nivel superior menor de un 10 % para ambos parámetros.

Además, se aplicó la prueba de Dixon para descartar errores groseros (r10 de la tabla de Dixon para una probabilidad del 5 %).


Los resultados que obtuvieron se reflejan en las dos tablas inferiores: se observa que el método cumple con los límites de aceptación establecidos previamente.